La domanda biologica d’ossigeno B.O.D. misura la frazione di ossigeno disciolto in (mg/l di ossigeno) utilizzata da una popolazione microbica eterogenea per stabilizzare, in condizioni specifiche di temperatura e tempo, il materiale organico biodegradabile presente in un acqua. Nel test di laboratorio il tempo di biodegradazione è ridotto a cinque giorni, durante i quali il campione di cui si vuole determinare il B.O.D. viene mantenuto al buio e alla temperatura di 20 °C. I principali microrganismi interessati in questo processo sono i batteri eterotrofi e quelli nitrificanti (autotrofi). I primi utilizzano il carbonio organico come alimento per le varie attività vitali (accrescimento, respirazione, riproduzione). I secondi invece utilizzano i composti ossidabili dell’azoto (ammoniaca e nitriti) come fonte di energia e l’anidride carbonica per la crescita. La misura del B.O.D viene effettuata controllando all’inizio e al termine del periodo di incubazione la concentrazione di ossigeno disciolto. L’impoverimento dell’ossigeno espresso in mg/l di ossigeno molecolare corrisponde alla misura del B.O.D. .Richiesta chimica di ossigeno (C.O.D.). Con il termine C.O.D. si intende l’ossigeno consumato per ossidazione chimica da un campione d’acqua inquinata da sostanze organiche ed eventualmente, da sostanze inorganiche, sotto specifiche condizioni di temperatura e di tempo da parte di un energico ossidante quale il dicromato di potassio in soluzione fortemente acida per acido solforico. Il risultato si esprime in mg/l di ossigeno che equivalgono alla quantità di ossidante necessaria per la reazione. Con questo metodo si può rilevare la presenza di sostanze organiche particolarmente stabili all’ossidazione chimica e degradabili biochimicamente. La determinazione del C.O.D. , se da una parte presenta innegabili vantaggi legati principalmente alla possibilità di ottenere i risultati in breve tempi (2-3 ore), di rilevare anche la presenza di sostanze non valutabili con il B.O.D., come per esempio la cellulosa, di valutare il carico organico anche in presenza di composti tossici, dall’altra va soggetta ad alcune limitazioni . Le leggi della tutela delle acque dall’inquinamento, impongono per gli scarichi di origine civile e industriale una concentrazione limite pari a 160 mg/l di ossigeno nel caso si calcoli il C.O.D.